本文(wén)為(wèi)系列文(wén)章《大分(fēn)子生物(wù)分(fēn)析概论》的第九篇，旨在根据已发表的文(wén)献资料，介绍大分(fēn)子生物(wù)分(fēn)析中对关键试剂的管理(lǐ)。由于内容篇幅较長(cháng)，本文(wén)将采取上下篇形式进行推送，敬请垂注！《袁来如此》专栏系广州博济医药微信公众号打造的科(kē)普學(xué)术专栏，内容均為(wèi)博济医药子公司深圳博瑞副总经理(lǐ)袁智博士原创。1.导论配體(tǐ)结合式测试方法（ligand binding assays, LBA）广泛地用(yòng)于测定生物(wù)药在动物(wù)和人體(tǐ)體(tǐ)液中的浓度，从而评估其药代动力學(xué)、免疫原性以及与疾病相关的生物(wù)标志(zhì)物(wù)。是而这些测试方法的基础则是试剂，LBA方法的特异性、选择性和灵敏度都取决于这些试剂。受药物(wù)的应用(yòng)、开发阶段、业務(wù)和资源的影响和限制，LBA试剂的多(duō)样性及其应用(yòng)，演进出多(duō)样化的管理(lǐ)方法。例如，非临床毒理(lǐ)學(xué)（TK）和临床药代动力學(xué)（clinical PK）的分(fēn)析任務(wù)可(kě)能(néng)类似；但对用(yòng)于临床检测方法，随着新(xīn)药项目通过临床开发的不同阶段，需要对试剂的多(duō)个批次变化及其長(cháng)期存储的稳定性进行管理(lǐ)。虽然没有(yǒu)一个适合所有(yǒu)状况的应对方法，管理(lǐ)试剂生命周期的努力往往分(fēn)為(wèi)两类：（1）对大量使用(yòng)的某一个批次的试剂，其存储稳定性和物(wù)流将是主要问题；（2）如果使用(yòng)小(xiǎo)批次，批次更改的管理(lǐ)将是主要问题。业内已然认识到，某些试剂至关重要，其变化会显著地改变或削弱使用(yòng)它们的测试方法的性能(néng)。对关键试剂的控制是保证LBA测试方法的质量和效能(néng)長(cháng)期一致的基础。尽管目前的监管指南為(wèi)PK和免疫原性测试方法的验证提供了非常具體(tǐ)的指导，但一般没有(yǒu)就关键试剂的生命周期的许多(duō)方面提供足够的指导，包括试剂的稳定性。美國(guó)FDA和欧洲药品管理(lǐ)局（EMA）发布的生物(wù)分(fēn)析方法的指南只是提供了一些与关键试剂相关的关注点。在日本，关于LBA的指南草(cǎo)案现已公开审议。巴西、中國(guó)和印度则没有(yǒu)任何相关指南。已发布的指导文(wén)件和白皮书对关键试剂的管理(lǐ)大多(duō)只是泛泛而谈，在如何管理(lǐ)不断变化的关键试剂方面缺乏通用(yòng)的实际操作指南：包括重要和次要批次更改、文(wén)档记录、测试试剂的稳定性及其性能(néng)标准和批次间的连续性。因此，整个行业需要一个统一的方法，以提高一致性，并基于健全的科(kē)學(xué)和监管原则作出相关决策。经过研究有(yǒu)关LBA关键试剂的全球指南和文(wén)献，本文(wén)总结出如下共识和最佳做法供讨论和实施：根据经验和研究已发表的文(wén)献，试剂需要在测试方法的生命周期的背景下加以考虑和管理(lǐ)。特别是，对一个关键试剂的表征，对于最初选择该试剂和在该测试方法的整个生命周期内有(yǒu)效地供应这个关键试剂，非常重要。以下主要关注四个方面：• 关键试剂的记录文(wén)档• 内部关键试剂与商(shāng)用(yòng)试剂的异同• 关键试剂的更换• 关键试剂的稳定性。本文(wén)不打算考虑的议题包括参比试剂（reference standards）和内标（internal standards），基于细胞的PK测试方法和抗药物(wù)抗體(tǐ)（ADA）检测所需的样本基质以外的基质。总體(tǐ)而言，对于关键试剂管理(lǐ)存在着多(duō)种做法的结论，在某些领域形成了高度共识。值得一提的是，相关调查结果表明，有(yǒu)关文(wén)档记录的监管指南有(yǒu)不一致之处，特别是对于批次变更，只有(yǒu)约 50% 的法规指南具有(yǒu)解决批次变更的程序。大多(duō)数被调查者表示拥有(yǒu)关键试剂的生产程序，但没有(yǒu)过期后有(yǒu)效期再延長(cháng)的程序。2.建议和最佳做法关键试剂的定义虽然在某些情况下，测试方法的任何组成成分(fēn)对其性能(néng)都可(kě)能(néng)至关重要，但对任何特定测试方法的关键试剂都需要产生一个准确定义。难以生产、替换、获取或取代的试剂可(kě)被视為(wèi)稀有(yǒu)关键试剂；相反，更通用(yòng)的试剂，如抗轻链或重链抗體(tǐ)，在某些检测中也可(kě)能(néng)至关重要。免疫捕获与LC-MS结合的测试方法可(kě)能(néng)需要将捕获抗體(tǐ)视為(wèi)关键试剂，即使是测试缓冲液或阻断试剂也可(kě)能(néng)对ADA检测的性能(néng)至关重要。如果需要将某个试剂定义為(wèi)关键试剂，就需要主动地管理(lǐ)试剂的可(kě)及性和可(kě)重复性，应当通过制定书面的相关程序，用(yòng)以定义某些试剂為(wèi)关键试剂，并在整个测试方法的生命周期内管理(lǐ)这些试剂。虽然大多(duō)数监管机构尚未定义关键试剂，但确实讨论了LBA相关试剂的关键性质。2001年发布的FDA《生物(wù)分(fēn)析方法验证的行业指南》中将一些试剂定义為(wèi)重要和关键（key and critical），并概述了在测试方法的整个生命周期中管理(lǐ)这些试剂的各个方面，包括交叉反应性（cross-reactivity）、储存条件的定义、稳定性评估以及当批次改变时，评估抗體(tǐ)和标记了的被分(fēn)析物(wù)（示踪剂，tracer）的性能(néng)，都表明了这些试剂的关键性质和是需要评估的。这些评估的需求可(kě)以很(hěn)容易地扩展到其它的LBA试剂。2011年EMA生物(wù)分(fēn)析方法验证指南支持并拓宽了2001年FDA指南中的关键/关键试剂的概念。这些指南认识到测试方法的特异性是由所使用(yòng)的试剂决定的，对关键试剂的控制对于测试方法的质量和長(cháng)期保持其效能(néng)是至关重要的，监管机构和一些文(wén)献都提出将某些试剂确定為(wèi)关键试剂。本文(wén)建议定义以下关键试剂：对待测物(wù)（analyte）特异性的LBA分(fēn)析试剂通常被视為(wèi)关键试剂（抗體(tǐ)，多(duō)肽，蛋白质，耦合物(wù)（标记），作為(wèi)试剂的药物(wù)和ADA试剂（阳性和阴性对照品）。EMA指南将关键试剂定义為(wèi)"...结合试剂（binding reagents），例如，结合蛋白、aptamer、抗體(tǐ)或耦合后的抗體(tǐ)）和那些含有(yǒu)酶活性域，对测定结果有(yǒu)直接影响的试剂......"。生物(wù)分(fēn)析界同意并扩大这一定义，以包括多(duō)肽，如受體(tǐ)或配體(tǐ)及它们的片段。监管指南非常明确地说明了，对于PK标准品（PK reference standards），需要如何作為(wèi)标准品进行控制和评估。然而，PK标准品也可(kě)以成為(wèi)一个关键的试剂，无论是在免疫原性还是靶标生物(wù)标志(zhì)物(wù)的检测中（通常是在耦合后）。生物(wù)标志(zhì)物(wù)的校准物(wù)（Biomarker calibrators）通常遠(yuǎn)不如药物(wù)标准品（drug reference standards）的表征充分(fēn)。因此，批次变化更难于控制，而且往往得不到来自认可(kě)源头（例如，US Pharmacopeial Convention）的校准物(wù)。虽然生物(wù)标志(zhì)物(wù)校准物(wù)不在本文(wén)讨论的范围内，但可(kě)以总结性地指出，关于生物(wù)标志(zhì)物(wù)校准物(wù)的具體(tǐ)指南通常都缺乏，因而在预期做法与实际操作之间存在很(hěn)大差距。3.关键实际的表征（Characterization）和认证（Qualification）关键试剂的质量是稳健地开发测试方法所必须的基本组成部分(fēn)。测试试剂是根据它们对待测物(wù)（the analyte of interest）的特异性和样本基质以及其它试剂的交叉反应特性而开发和选择的。在方法开发之前和期间，可(kě)以通过多(duō)种方式测试这些试剂的特异性和交叉反应性。理(lǐ)解选择这些试剂的方式、原因以及性能(néng)，对于选择和认证新(xīn)批次的试剂（如果需要的话）是非常重要的。临床和实验室标准研究所的指南强调需要对试剂进行表征，并提供了关键特性的指导。一旦测试方法开发完成并确定了关键试剂，就可(kě)以定义重新(xīn)供应（resupply）关键试剂的风险。例如考虑复杂的免疫策略。对于商(shāng)业来源的试剂，稀缺性（rarity）是主要挑战（例如，单一供应商(shāng)/供货商(shāng)，细胞株的可(kě)及性）；对于内部试剂，纯化和耦联的复杂性或是挑战可(kě)能(néng)。监管指南指出，关键试剂的表征和认证应针对预设的用(yòng)途，但是所需要的试剂表征的程度，对给定的测试方法而言，差别可(kě)能(néng)很(hěn)大。因此，本文(wén)不详描述试剂表征和初始认证的评估范围，而是仅仅建议：进行足够的表征，以便在生成新(xīn)批次时，实现某种形式的一致性（consistency）和过程控制（process control），并且这种认证是有(yǒu)据可(kě)查的。试剂特征包括但不限于：身份(identity)、来源、纯度、浓度（或滴度）、结合亲和力（bindingaffinity）、等型（单克隆/多(duō)克隆抗體(tǐ)）、分(fēn)子量、特异性（specificity）、成合比（incorporation ratio）和聚合程度(aggregation level)。若干文(wén)献详细讨论了关键的试剂表征和测试方法，药物(wù)开发的阶段也是投资试剂表征的程度和范围的考虑因素之一。4.关键试剂的采購(gòu)考虑获得足够数量的关键试剂，无论是内部制备的，或是从商(shāng)业来源采購(gòu)的，最好是能(néng)够满足整个临床研究的需要。试剂可(kě)以在内部生产，也可(kě)以作為(wèi)定制生产或现成的试剂从商(shāng)业来源获得。然而，选择关键试剂的可(kě)靠来源，这个看起来显然很(hěn)简单的任務(wù)，却并非易事。这可(kě)能(néng)需要仔细规划、考虑利弊以及进行尽职调查。内部生产试剂可(kě)获得内部定制生产的试剂，以适应所设计的测试方法; 可(kě)以对其预设的用(yòng)途，进行大范围表征，可(kě)以自定义分(fēn)析证书（CofA），产生稳定性数据等。更重要的是，可(kě)以监测和控制批次间的变异性（特别是在标记蛋白质时）。此外，对内部生产的试剂的管控，可(kě)能(néng)允许更好地进行生命周期管理(lǐ)。然而，内部生产试剂需要熟练的人员以及大量的投资，以建立一个试剂生产的基础设施和预先规划的生产过程。商(shāng)业生产的试剂商(shāng)用(yòng)试剂广泛地用(yòng)于各种格式的LBA的开发。商(shāng)业试剂的主要优势包括：可(kě)以从多(duō)个供应商(shāng)处立即获得各种试剂，通常对预设用(yòng)途做过表征并附带有(yǒu)某种 CofA。此外，可(kě)以从多(duō)个来源获得各种检测试剂（标记过的蛋白），并在其中找到，对某个特定测定方法而言，性能(néng)卓越的检测试剂。除了现成的试剂外，许多(duō)供应商(shāng)还提供定制生产和特定试剂的表征。这种方式的主要好处是：信誉良好的测试试剂的制造商(shāng)通常拥有(yǒu)完善的生产设施，技术能(néng)力和知识储备，可(kě)以有(yǒu)效地支持试剂的生产和应用(yòng)。此外，它们还可(kě)以為(wèi)最终用(yòng)户提供出色的支持，包括定制试剂的生成和耦合以及解决应用(yòng)中出现的问题。然而，使用(yòng)商(shāng)业试剂并非没有(yǒu)挑战。有(yǒu)几个与商(shāng)业试剂有(yǒu)关的问题，可(kě)能(néng)需要仔细考虑。其中一些列在表1中，包括缺少试剂的稳定性数据、缺少可(kě)用(yòng)的试剂规格/批次放行的验收标准（尽管某些供应商(shāng)可(kě)能(néng)会应客户的要求提供该标准）以及缺乏相关试剂的其他(tā)基本信息。最大的挑战是未标记和标记的试剂批次之间的变异性。在使用(yòng)多(duō)个批次试剂的長(cháng)期研究中，这可(kě)能(néng)会造成桥接数据的困难。生产商(shāng)改变关键试剂的批次并不罕见，例如用(yòng)于生产偶联體(tǐ)的多(duō)克隆抗體(tǐ)池，它们可(kě)能(néng)符合批次放行的规范，但可(kě)能(néng)对最终用(yòng)户构成重大风险。此类变更很(hěn)可(kě)能(néng)无法及时传达给最终用(yòng)户。此外，特定试剂的生产可(kě)能(néng)会终止，并且不会提前通知客户。关于关键试剂采購(gòu)的建议鉴于商(shāng)业试剂来源于能(néng)力（雄厚的技术，支持性文(wén)件的实力，有(yǒu)提供多(duō)批次产品的能(néng)力）各不相同的多(duō)个供应商(shāng)，谨慎的做法是进行尽职调查和可(kě)行性评估，以选择可(kě)靠的试剂和供应商(shāng)。无论试剂是在内部生产还是从商(shāng)业来源获取，了解试剂具體(tǐ)特征的需求都是一样的。与供应商(shāng)建立密切关系是非常有(yǒu)益的，这有(yǒu)助于扩展技术支持的范围，以提高故障排除率，解决试剂相关问题，及时获取有(yǒu)关试剂批次变化的信息和确保特定批次的長(cháng)期供应。此外，如果只有(yǒu)一家关键试剂的供应商(shāng)，则建议考虑建立某种合同关系，这些合同关系可(kě)以给用(yòng)户预警产品更改或生产停止。下面列出了值得考虑的若干的要点：& 来自不同供应商(shāng)的相同浓度单位的重组蛋白和多(duō)肽在一个测试系统中可(kě)能(néng)有(yǒu)不同的表现。因此，选择并保留足够数量的试剂以满足長(cháng)期需要是有(yǒu)益的。在某些情况下，如果已在验证期间确定一个校正因子，或者已生成能(néng)支持该校正因子的实验数据，则可(kě)考虑使用(yòng)校正系数来补偿内容和比例错误（content and proportional errors）。& 供应商(shāng)通常拥有(yǒu)质量控制/质量保证和批次放行的流程。尽管通常不能(néng)审核这些流程，但在某些情况下，可(kě)能(néng)有(yǒu)机会对供应商(shāng)的设施进行QA审计。& 通常可(kě)以通过提出特定请求可(kě)以获得通常不伴随着试剂提供的文(wén)件（例如，与试剂的表征，稳定性，批次放行规范，等，相关的文(wén)件）。& 商(shāng)业化生产的预涂层固相支持物(wù)件，如電(diàn)化學(xué)发光和ELISA板材和珠子可(kě)能(néng)需要被视為(wèi)关键试剂。应该建立和记录与这些关键试剂相关的内部流程，如批次验收测试，以确保板材的涂层均匀，尤其是在使用(yòng)条带的情况下。对于使用(yòng)商(shāng)业试剂构建的内部生物(wù)标志(zhì)物(wù)的检测方法，应使用(yòng)含有(yǒu)内源性被分(fēn)析物(wù)（endogenous analyte）的混合（pooled）生物(wù)基质（如血清/血浆）作為(wèi)QCs，用(yòng)来监测不同批次的商(shāng)业试剂的性能(néng)。& 解释生产商(shāng)的失效期数据，作為(wèi)该试剂的测试/再测试的依据，因為(wèi)该试剂在超过"到期日期"后，可(kě)能(néng)仍适用(yòng)于预期用(yòng)途。请参阅“试剂稳定性”部分(fēn)，以得到相关的详细指导。表1.从内部和商(shāng)业来源获得的试剂的有(yǒu)关注意事项5.关键试剂的更换用(yòng)于配體(tǐ)结合测试方法的试剂通常由生物(wù)生产过程生产，而不是一个完全可(kě)控的合成过程。这将导致不同批次之间的可(kě)变性和异质性。蛋白生产出来之后，通常有(yǒu)纯化和标记步骤，这更增加了产品的复杂性。此外，通常需要在很(hěn)長(cháng)的一段时间里，使用(yòng)这些测试方法，以支持一个药物(wù)的整个生命周期，这意味着可(kě)能(néng)需要多(duō)个批次的试剂来支持長(cháng)期的测试。為(wèi)了尽量减少批次之间的可(kě)变性，必须拥有(yǒu)规范良好，并且前后一致的试剂生产流程；也必须按照相关的生产方案和标记程序(labeling procedures)生产，并且完整地记录整个流程。但是，方案（protocols）和程序（procedures）的详细程度往往不合适（见最近的例子见15）。所以必须认识到：对生产程序的描述越详细，试剂生产的可(kě)重复性就越大，更换关键试剂可(kě)能(néng)是面临的最重大的挑战之一。在2001年生物(wù)分(fēn)析方法验证指南中，FDA指出“...如果更改关键试剂，则可(kě)能(néng)需要重新(xīn)优化或验证该测试方法”。此外，EMA指南规定，当试剂批次更改时，必须确认测试方法的分(fēn)析效能(néng)，“以确保与原始批次或上一批次的试剂相比，该方法的效能(néng)不会改变”。对试剂的任何操作都代表该试剂成為(wèi)一个新(xīn)的批次（包括稀释）。OHara等人将试剂或某个批次试剂的更改归类為(wèi)需要不同评估的级别：即主要和次要的更改。这样的评估是由科(kē)學(xué)驱动。建议事先确定一套明确的绩效评估方法和验收标准，并详细记录验收标准和相关实验。相关文(wén)件可(kě)以是指导试剂更改的标准操作程序（SOP），也可(kě)以作為(wèi)最终方法报告的一部分(fēn)。事实上，并非所有(yǒu)生物(wù)分(fēn)析实验室都有(yǒu)相应的程序或者正式的SOP，用(yòng)以管理(lǐ)试剂批次的变更。在某些情况下，认证可(kě)能(néng)只是使用(yòng)新(xīn)试剂批次的单个测试运行，或者在同一运行中使用(yòng)新(xīn)和旧试剂的单个测试运行。与旧批次比较是有(yǒu)用(yòng)的，但不是绝对需要的，因為(wèi)在许多(duō)情况下，旧（或原始）批次可(kě)能(néng)已经用(yòng)完。某些实验室拥有(yǒu)定义更明确的、用(yòng)于批次变更的测试方法验证程序。在某些情况下，对新(xīn)试剂的定义也可(kě)能(néng)存在一些差异，例如从同一原始材料生产出来的新(xīn)批次。业界最初认為(wèi)，新(xīn)批次试剂的认证和稳定性测试的接受标准应包括最大的仪器响应。然而，对基于仪器响应的信号控制图（signal control charts）的效用(yòng)有(yǒu)不同意见。因此，需要关注下列事项：用(yòng)于生成检测信号的分(fēn)析平台；比较同一仪器随时间而获取的信号的能(néng)力；比较不同仪器的所产生的信号的能(néng)力以及环境温度等变量的影响。关于更换关键试剂的建议本文(wén)建议在一个功能(néng)性测试中测试新(xīn)试剂，并采用(yòng)预先验设立的检测验收标准。下面提出了认证这些关键试剂的两级式方法，测试的范围是由该试剂的变化程度，或者这些变化可(kě)能(néng)产生的影响程度所驱动的。在测试中，通常使用(yòng)外加待测物(wù)的QCs来定义该方法的效能(néng)，但对于生物(wù)标志(zhì)物(wù)的测定，可(kě)能(néng)需要包括含有(yǒu)内源性待测物(wù)（endogenousanalyte）的，基于真实样本的QCs，以确保commutability（可(kě)变性）。细微变化试剂的细微变化被定义為(wèi)预期对测试性能(néng)影响极小(xiǎo)的试剂改变；因此可(kě)以实施相关改变，而不会对数据生成产生任何有(yǒu)害影响。这种细微变化的例子是一个从以前认证过的原液发展而来新(xīn)的试剂批次，如：从相同动物(wù)的多(duō)克隆血清做的新(xīn)一次亲和纯化的产品；或使用(yòng)相同批次的蛋白质做的新(xīn)一次耦合反应，而该耦合过程已经被证明是受控良好的。用(yòng)于制备新(xīn)一个试剂批次的过程应与用(yòng)于生成原始批次的过程相同。第一个测试级别包含所有(yǒu)试剂的资格认证计划中所共有(yǒu)的测试（图1）。& 推荐测试运行一次，包括3个级别的QC样品，但更理(lǐ)想的是包括定量下限和上限在内的，总共5个QC，因為(wèi)定量范围的两个极端是PK和生物(wù)标志(zhì)物(wù)测试方法最脆弱的地方。对于免疫原性测试，应包括3个级别的QC样品，包括接近切点的阴性和低阳性对照样品。& 如果同时更换多(duō)个试剂，则可(kě)以使用(yòng)同一检测方法一起测试并认证这些试剂。建议执行多(duō)个测试运行，以提高对结果的信心，并且最大程度地降低接受假阳/阴性结果而导致的风险。但是，如果一次只更换一个试剂，则一次运行可(kě)能(néng)就足够了。& 建议在可(kě)能(néng)的情况下，并行地测试当前试剂与原始试剂。与原始批次的比较在监视或控制测定方法性能(néng)的漂移方面非常有(yǒu)用(yòng)。但是，在没有(yǒu)可(kě)比较批次的情况下，对最大信号和/或 QC信号的监控就变得更加重要了。& 一旦从适当的认证测试生成了可(kě)接受的数据，其结果应作為(wèi)能(néng)够接受试剂更换的记录，无需再做进一步认证。& 在结果不符合接受标准的情况下，可(kě)能(néng)需要进一步单独测试以确定失败的原因。单次失败可(kě)以通过重新(xīn)制备一次标准样品和QCs，并重新(xīn)测试来补救。然而，反复的失败至少会表明需要制备一个新(xīn)试剂批次，并可(kě)能(néng)重新(xīn)优化该测试方法。反复的失败也可(kě)能(néng)表明需要生产一批新(xīn)的原始试剂；但这将被视為(wèi)一个重大变更。& 建议监控QC样品的最大仪器响应，但仅仅作為(wèi)判断测试方法性能(néng)的一个工具，而不是作為(wèi)接受标准。随着在较長(cháng)持续时间内或较大研究中收集，整理(lǐ)更多(duō)的数据，跟踪QC最大仪器响应趋势的价值会随之增加。重大变更这是最高的试剂认证级别，主要适用(yòng)于在一个试剂的原始来源枯绝，需要更换关键试剂的情况。此时，将确定新(xīn)的供应商(shāng)，表征新(xīn)的试剂，并证明新(xīn)试剂的测试性能(néng)。重大变化的例子包括从新(xīn)动物(wù)获得的抗體(tǐ)批次、用(yòng)于单克隆抗體(tǐ)生产的新(xīn)克隆，或用(yòng)于生产重组物(wù)料的新(xīn)细胞系。其中每个变更都预期需要广泛的重新(xīn)认证。為(wèi)了维持测试方法的性能(néng)，一个不太明显，但有(yǒu)时是必不可(kě)少的任務(wù)，可(kě)能(néng)是采用(yòng)一个新(xīn)批次的阴性对照品，这对于免疫原性测试的关系特别重大。除采纳对试剂细微变更时的认证建议外，对测试试剂的重大变更也应考虑采取以下行动（图1）：& 应至少执行三次测试运行，以表征新(xīn)试剂的测试性能(néng)。& 在多(duō)次运行中，并行测试新(xīn)试剂和原始试剂。如果新(xīn)试剂不符合测试接受标准和/或其测试性能(néng)发生变化，但试剂仍然适合用(yòng)于测试目的，则新(xīn)试剂可(kě)能(néng)是可(kě)以接受的，但需要更广泛的认证，如部分(fēn)方法验证。& 还需要其他(tā)数据来描述和正确记录新(xīn)试剂对测试方法参数的全面影响。图1.关键试剂管理(lǐ)流程的总结 10.特别声明本文(wén)如有(yǒu)疏漏和误读相关指南和数据的地方，请读者评论和指正。所有(yǒu)引用(yòng)的原始信息和资料均来自已经发表學(xué)术期刊, 官方网络报道, 等公开渠道, 不涉及任何保密信息。参考文(wén)献的选择考虑到多(duō)样化但也不可(kě)能(néng)完备。欢迎读者提供有(yǒu)价值的文(wén)献及其评估。参 考 文(wén) 献1. 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